Se cierra esta capilla con una espléndida reja renacentista realizada en 1555 por Pedro Delgado, siguiendo un diseño de Martín de Gaínza; en su remate figura una magnifica representación del Santo Entierro. El interior se ilumina con una vidriera obra de Arnao de Flandes hacia 1556, en la que se describe el tema de Los Desposorios de la Virgen y San José.
La capilla tuvo el patronato de Don Diego Caballero, quien fue mariscal de la Isla de la Española desde 1536, año en que obtuvo el nombramiento de Carlos I. El magnifico retablo que preside la capilla fue encargado por el patrono a Pedro de Campaña en 1555, quien, con la ayuda de Antonio de Arfian, lo realizo en ocho meses. En los laterales inferiores del banco de este retablo aparecen los retratos de Don Diego Caballero, su hermano Don Alonso y su hijo, situados a la izquierda del mismo mientras que a la derecha aparece la esposa de Don Diego, Doña Leonor de Cabrera, su hermana Doña Mencía, casada a su vez con Don Alonso, y sus hijas. En la tabla central del banco aparece la escena de Cristo entre los doctores. La pintura central del retablo es una excepcional representación de La Purificación de la Virgen, donde Campaña, recreando grabados de Durero y Rafael, acierta a traducir una de las mejores composiciones de la pintura renacentista española. El conjunto de figuras femeninas que intervienen en esta escena tiene una significación alegórica, ya que cada una de ellas simboliza las virtudes que habían de adornar a la Virgen en su vida futura ; así se pueden identificar a la Caridad, Templanza, Justicia, Fortaleza, Prudencia, Fe y Esperanza. En las calles laterales del retablo se encuentran pinturas de La Imposición de la casulla a San Ildefonso, Santiago, Santo Domingo y La estigmación de San Francisco. En el ático figura La Resurrección y en el remate El Calvario.
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